我想用hplc分离一个简单的多肽,我应该选用什么样的流动相,还有他的梯度,还有选用什么样的柱子
答: rp-hplc,c18柱可以制备很少量的肽。如果用rp-hplc,首先应该用同类型的分析柱子分析一下多肽含多少杂质,设置缓缓的梯度的分离样品,在根据分析柱子跑出的峰形,逐渐放大纯化的方法。
基线漂移
1.检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口,产生噪音基线)
取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。
2.流动相配比不当或流速变化
更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
3.柱平衡慢,---是流动相发生变化时
用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,---制备色谱系统,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
4.流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
检查流动相的组成。用的化学试剂及hplc级的溶剂
低压:一般而言,低压适合易分离化合物,但分离时间长很容易造成敏感化合物分解。中压:中压一般采用恒流泵提供恒定的流动相流速,填料颗粒更小,---制备色谱系统价格,分辨率更高,耐受更高压力和更快流速。高压:高压通常在分离制备的后阶段采用,应用于分离困难的样品,---制备色谱系统便宜,纯度甚至能达到99.9%。
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