液相色谱分析的流程

由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。

遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而hplc改变的是流动相极性，使样品各组分在较佳条件下得以分离。

液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，hplc也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，a、b和c，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分a不易被固定相阻留，较早地流---谱柱。分配系数大的组分c在固定相上滞留时间长，较晚流---谱柱。组分b的分配系数介于a，c之间，第二个流---谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流---谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

　液相色谱基本功能为

1、六种定量计算方法:归一法、修正归一法、带比例因子的修正归一法、内标法、外标法及指数计算法.　　

2、校准运行:能够实现使用多种不同浓度的标准试样进行校准,建立样品浓度──面积校正曲线.　　

3、灵活的峰识别和处理能力:可以通过设置峰处理参数和时间程序识别色谱峰的处理,也可以用人工方式进行处理.　　

4、色谱图形、设定的定量计算方式、峰处理参数及峰鉴定表等可以保存到用户自命名的文件中.

半制备液相色谱层析系统如何进样品

1、将进样器扭到load朝上，吸取一定量待分离液，快速注入，做过的是吸取0.2毫升;

2、---控制界面菜单栏中“运行控制”按钮样品信息设置信息存储路径(每次都要做);

3、扭动进样器，使处于inload状态，保留时间开始计时;

4、接峰;

5、所有峰出来后，---菜单栏中的中断中断，准备重复进样。